Magkano ang gastos sa pagbabago ng ligation?
Magkano ang gastos sa pagbabago ng ligation?

Video: Magkano ang gastos sa pagbabago ng ligation?

Video: Magkano ang gastos sa pagbabago ng ligation?
Video: Puwede pa bang mabuntis kung ligated na? vlog 137 2024, Nobyembre
Anonim

Pagbabago . Magdagdag sa pagitan ng 1-5 µl ng ligasyon halo sa karampatang mga cell para sa pagbabagong-anyo . Extended ligasyon na may PEG ay nagdudulot ng pagbaba pagbabagong-anyo kahusayan (Mabilis Ligation Kit). Inirerekomenda ang electroporation para sa malalaking konstruksyon (>10, 000 bp).

Dito, gaano karaming produkto ng ligation ang kailangan ko para sa pagbabago?

Pagbabago . Magdagdag sa pagitan ng 1-5 µl ng ligasyon halo sa karampatang mga cell para sa pagbabagong-anyo . Extended ligasyon na may PEG ay nagdudulot ng pagbaba pagbabagong-anyo kahusayan (Mabilis Ligation Kit). Inirerekomenda ang electroporation para sa malalaking konstruksyon (>10, 000 bp).

Kasunod nito, ang tanong ay, ano ang Ligation at pagbabagong-anyo? Sa isang tipikal na eksperimento sa pag-clone, ang mga mananaliksik ay unang nagpasok ng isang piraso ng DNA, tulad ng isang gene, sa isang pabilog na piraso ng DNA na tinatawag na plasmid. Ang hakbang na ito ay gumagamit ng restriction enzymes at DNA ligase at tinatawag na a ligasyon . Pagkatapos ng a ligasyon , ang susunod na hakbang ay ilipat ang DNA sa bacteria sa isang prosesong tinatawag pagbabagong-anyo.

Kasunod nito, maaari ring magtanong, gaano karaming DNA ang kailangan para sa isang ligation?

Ang kabuuang konsentrasyon ng vector + insert ay dapat nasa pagitan ng 1-10 Μg/ml para sa mahusay ligasyon . Vector:Insert molar ratios sa pagitan ng 1:1 at 1:10 ay inirerekomenda (1:3 ay tipikal). Kung hindi ka sigurado sa iyong DNA concentrations, magsagawa ng maramihang ligations na may iba't ibang ratios.

Gaano katagal ka makakapag-imbak ng isang ligation reaction?

Maaari ang mga ligasyon gawin sa temperatura ng silid o mas malamig (sa tingin 12-16°C) magdamag o kahit sa loob ng ilang araw, kung ikaw busy talaga. Kaya mo din mag-imbak ng ligation sa refrigerator at ilabas ito sa ibang pagkakataon upang ipagpatuloy ang pag-ligate sa temperatura ng kuwarto para sa mahaba kung kinakailangan.

Inirerekumendang: